干熱滅菌二氧化碳培養(yǎng)箱結(jié)合了高溫滅菌與細(xì)胞培養(yǎng)功能，其操作規(guī)程需兼顧滅菌效果與設(shè)備保護(hù)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化步驟實(shí)現(xiàn)無(wú)菌環(huán)境的精準(zhǔn)控制。?
操作前準(zhǔn)備需執(zhí)行嚴(yán)格的檢查與清理。首先移除腔內(nèi)所有培養(yǎng)物與附件，用75%酒精擦拭內(nèi)壁、隔板及傳感器表面，重點(diǎn)清理角落殘留的細(xì)胞碎片與培養(yǎng)基殘?jiān)z查干熱滅菌專(zhuān)用托盤(pán)是否放置平穩(wěn)，確保與加熱元件間距≥5cm，避免局部過(guò)熱。關(guān)閉水套式培養(yǎng)箱的加水口，排空加濕盤(pán)內(nèi)的液體，防止滅菌過(guò)程中產(chǎn)生蒸汽影響溫度均勻性。確認(rèn)門(mén)體密封條完好無(wú)破損，閉合門(mén)體后觀察壓力指示燈，確保腔內(nèi)處于密閉狀態(tài)(壓力維持在-5至-10Pa)。?
滅菌參數(shù)設(shè)置需根據(jù)污染程度調(diào)整。常規(guī)維護(hù)性滅菌選擇180℃、2小時(shí)程序，適用于日常使用后的預(yù)防性處理；針對(duì)疑似污染(如真菌、芽孢污染)，需啟用強(qiáng)化模式：200℃、3小時(shí)，同時(shí)開(kāi)啟腔內(nèi)風(fēng)扇循環(huán)(風(fēng)速設(shè)定為中速)，確保溫度偏差≤±2℃。設(shè)置完成后按下“滅菌啟動(dòng)”鍵，設(shè)備將自動(dòng)執(zhí)行預(yù)熱(從室溫升至設(shè)定溫度約需40分鐘)、恒溫滅菌、自然降溫流程。滅菌過(guò)程中需鎖定操作面板，張貼“滅菌中，禁止開(kāi)門(mén)”警示標(biāo)識(shí)，避免誤操作導(dǎo)致人員燙傷。?
關(guān)鍵操作節(jié)點(diǎn)的控制直接影響滅菌質(zhì)量。當(dāng)溫度升至160℃時(shí)，設(shè)備會(huì)自動(dòng)觸發(fā)二次密封，此時(shí)需確認(rèn)門(mén)體鎖扣咬合；恒溫階段需每30分鐘記錄一次溫度(通過(guò)外接溫度記錄儀)，確保無(wú)明顯波動(dòng)。降溫階段嚴(yán)禁強(qiáng)制開(kāi)門(mén)或開(kāi)啟冷卻功能，需等待腔內(nèi)溫度降至80℃以下(通常需3-4小時(shí))，方可打開(kāi)門(mén)體通風(fēng)，避免溫度驟變導(dǎo)致腔體變形。對(duì)于帶有HEPA過(guò)濾器的機(jī)型，滅菌后需檢查過(guò)濾器完整性，若出現(xiàn)破損需立即更換(過(guò)濾效率需≥99.99%)。?
滅菌后恢復(fù)與驗(yàn)證保障培養(yǎng)環(huán)境可靠。待溫度降至37℃后，重新添加滅菌水至加濕盤(pán)(水位不超過(guò)MAX線)，開(kāi)啟CO?供氣閥門(mén)，設(shè)定濃度為5%。運(yùn)行24小時(shí)后進(jìn)行參數(shù)驗(yàn)證：用經(jīng)校準(zhǔn)的溫度計(jì)測(cè)量腔內(nèi)溫度(偏差≤±0.3℃)，用紅外氣體分析儀檢測(cè)CO?濃度(波動(dòng)范圍≤±0.2%)，用濕度計(jì)確認(rèn)相對(duì)濕度≥95%。一開(kāi)始使用前需進(jìn)行無(wú)菌驗(yàn)證，將胰蛋白胨大豆瓊脂平板暴露于腔內(nèi)8小時(shí)，37℃培養(yǎng)48小時(shí)后應(yīng)無(wú)菌落生長(zhǎng)。?
日常維護(hù)需配合滅菌周期進(jìn)行：每滅菌3次更換一次HEPA過(guò)濾器，每月清潔溫度與CO?傳感器，每季度校準(zhǔn)一次所有參數(shù)。操作過(guò)程中需佩戴耐高溫手套與護(hù)目鏡，避免直接接觸高溫部件。通過(guò)嚴(yán)格執(zhí)行這套規(guī)程，可確保滅菌合格率達(dá)100%，同時(shí)延長(zhǎng)設(shè)備使用壽命至8年以上，為細(xì)胞培養(yǎng)提供穩(wěn)定的無(wú)菌環(huán)境。
更新時(shí)間：2025-08-18
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